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高效液相色谱仪分析领域

发布时间:2021-07-16

                  

       高效液相色谱仪是分析化学中最强大的技术之一,可以分离、鉴定和定量药物和药物相关杂质。典型的高效液相色谱仪系统由固定相、不同极性的流动相和紫外检测器组成。固定相通常是硅胶载体颗粒和固定在其上的键合物质的固体柱壳。高压迫使分析物组分根据其相对极性移动通过色谱柱。有四种不同的类别:正相色谱、反相色谱、亲水相互作用色谱和离子交换色谱。


反相色谱
反相色谱利用经 4 至 18 个碳链修饰的硅胶,并根据疏水性分离分析物的组分。在固定相上,亲脂性越强的化合物吸附越强。然后分子将被流动相上的极性溶剂从柱子上洗脱下来。



正相色谱
正相色谱法根据分析物对色谱柱固定表面的亲和力来分离分析物组分。未改性的二氧化硅颗粒通常与从非极性溶剂到极性溶剂的梯度一起使用。吸收强度是分子极性的函数。极性越大的分子被固定相保留得越强,并被极性增加的溶剂从柱子上依次洗脱。



相互作用的液相色谱
高效液相色谱是正相色谱的一种变体,是一种在极性固定相上有效分离小极性化合物的替代技术。高效液相色谱仪的分离机理比正相色谱更复杂,高效液相色谱仪可以与其他正相和反相色谱互补。高效液相色谱仪使用传统固定相和含有丰富有机溶剂的流动相来增强化合物与固定相之间的亲水相互作用。高效液相色谱仪 可以分离小分子有机酸、药物、许多中性和带电物质,并成功用于分析碳水化合物、肽、极性药物等。 


离子交换色谱
IEC 根据分析物的总电荷来分离分析物的成分。在离子交换色谱中,带有阴离子交换树脂或阳离子交换树脂的固定相用于根据它们对色谱柱中固定表面的亲和力来分离不同的可电离分子。分子净电荷为零时的 pH 值称为等电点 ( pI )。蛋白质的总电荷随其环境的 pH 值而变化,这使得在具有特定 pH 值的溶液中分离不同的分子成为可能。


我们可以提供基于高效液相色谱的检测不限于:
大量蛋白质消耗
聚合和片段分析
氨基酸和细胞培养分析
抗体滴度测定
电荷变异分析
聚糖分析
完整和亚基分析
寡核苷酸分析
肽图分析

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